簡介：確定間充質(zhì)干細胞 (MSC)-神經(jīng)營養(yǎng)因子 (NTF) 細胞（NurOwn?，自體骨髓來源的間充質(zhì)干細胞，誘導(dǎo)分泌NTFs）的安全性和有效性，這些細胞通過鞘內(nèi)和肌肉內(nèi)聯(lián)合給藥遞送至患有肌萎縮性側(cè)索硬化癥（漸凍癥）的參與者 ( ALS）在第2階段的隨機對照試驗中。

方法：該研究招募了48名參與者，隨機分配3:1（治療：安慰劑）。移植前3個月后，參與者接受了1劑MSC-NTF細胞（n=36）或安慰劑（n=12），并接受了6個月的隨訪。在移植前和移植后2周收集CSF。

結(jié)果：該研究達到了其主要安全終點。整個研究人群的疾病進展率在接受治療的參與者和安慰劑參與者中相似。在預(yù)先指定的快速進展者亞組 (n=21) 中，疾病進展率在早期時間點有所改善 (p<0.05)。為了解決異質(zhì)性，反應(yīng)者分析顯示，與安慰劑組相比，接受治療的參與者在所有時間點的ALSFRS-R斜率改善≥1.5點/月的比例更高，并且在4周和12周時在快速進展者中顯著。在接受治療的參與者中，CSF神經(jīng)營養(yǎng)因子增加，CSF炎癥生物標志物減少（p<0.05) 移植后。CSF單核細胞趨化蛋白1水平與ALSFRS-R斜率改善相關(guān)長達24周 (p<0.05)。

結(jié)論：間充質(zhì)干細胞-神經(jīng)營養(yǎng)因子細胞的單劑量移植是安全的，并顯示出早期有希望的療效跡象。這為自體間充質(zhì)干細胞 (MSC)-神經(jīng)營養(yǎng)因子鞘內(nèi)移植治療漸凍癥的多劑量隨機臨床試驗確立了明確的前進道路。

肌萎縮側(cè)索硬化癥 (ALS) 是一種致命的神經(jīng)退行性疾病，其特征是大腦和脊髓中運動神經(jīng)元的退化和死亡，并導(dǎo)致進行性肌肉無力和呼吸衰竭。ALS的復(fù)雜發(fā)病機制，包括神經(jīng)炎癥的突出作用，表明新興的ALS治療將需要解決該疾病的多個相互關(guān)聯(lián)的方面。

骨髓來源的間充質(zhì)干細胞 (MSC) 是多能祖細胞，在神經(jīng)退行性疾病中表現(xiàn)出很高的治療潛力。MSCs可以增強神經(jīng)發(fā)生，調(diào)節(jié)神經(jīng)炎癥，并有助于神經(jīng)保護。我們利用神經(jīng)營養(yǎng)因子 (NTF) 的治療潛力，將骨髓來源的患者自體MSC誘導(dǎo)到MSC-NTF細胞 (NurOwn) 中，分泌高水平的多種NTF3并具有獨特的miRNA特征，證明其優(yōu)于MSC起源于幾種神經(jīng)退行性疾病模型。

波士頓麻省總醫(yī)院神經(jīng)臨床研究所和哈佛醫(yī)學(xué)院《Neurology》期刊中，發(fā)表一篇關(guān)于干細胞治療漸凍癥的2期臨床試驗。在開放標簽試驗中，NurOwn的鞘內(nèi)移植證明了安全性和耐受性，并通過減緩移植后修訂版肌萎縮側(cè)索硬化功能評定量表 (ALSFRS-R) 的下降速度顯示出初步的療效證據(jù)。

此2期雙盲安慰劑對照多中心試驗的主要目的是確定通過IT和IM聯(lián)合注射對ALS參與者施用MSC-NTF細胞的安全性。預(yù)先指定的分析調(diào)查了MSC-NTF細胞對總體人群和治療前下降≥2ALSFRS-R點的快速進展者亞組ALSFRS-R斜率的影響。CSF移植前和移植后的分析評估了干預(yù)對相關(guān)MSC和ALS疾病生物標志物的影響。

詳細結(jié)果

安全：該試驗達到了其主要安全終點；因此治療是安全的。43名參與者 (90%) 完成了隨訪期（33名MSC-NTF，10名安慰劑）。五名參與者停止了面對面的隨訪；其中，2人通過遠程電話隨訪完成了試驗，因此被納入所有安全性和修訂后的肌萎縮側(cè)索硬化功能評定量表（ALSFRS-R）分析（1例MSC-NTF，1例安慰劑；圖1B)。研究期間沒有死亡，沒有與治療相關(guān)的 SAE，也沒有導(dǎo)致退出的AE。MSC-NTF治療組的兩名參與者在放置飼管后因呼吸衰竭接受了氣管切開術(shù)，大約在治療后4個月。

在研究過程中，11名參與者——MSC-NTF細胞組9/36 (25%) 和安慰劑組2/12 (17%)——發(fā)生了16次SAE（表2)。兩次SAE發(fā)生在進入試驗后但治療前。所有治療中出現(xiàn)的SAE（開始研究治療后發(fā)生的AE）都被認為與ALS疾病進展有關(guān)，沒有一個被認為可能、可能或肯定與研究治療相關(guān)。DSMB沒有發(fā)現(xiàn)任何引起關(guān)注的不良事件、實驗室異常（血液血液學(xué)、化學(xué)、尿液分析）或重大方案偏差。

按治療組劃分的不良事件 (AE) 和嚴重AE (SAE) 的總體總結(jié)：安全人群。

療效分析

修訂后的肌萎縮側(cè)索硬化功能評定量表LS平均斜率變化

在篩選時，MSC-NTF和安慰劑組的ALSFRS-R評分相似（分別為38.1±3.6和38.6±3.85）。兩組的預(yù)處理ALSFRS-R斜率相似：-0.7點/月（MSC-NTF）和-0.6點/月（安慰劑）。

移植后ALSFRS-R斜率的變化在2周 ( p=0.110)時為+1.7點/月 (MSC-NTF) 和-0.4點/月（安慰劑），以及+0.6點/月（MSC-NTF) 和 -0.03 分/月（安慰劑）在4周時 ( p=0.368)。8周后，兩個治療組的斜率變化相似（圖2A)。

圖2：修訂后的ALS功能評定量表 (ALSFRS-R) 斜率隨時間（頂部）和響應(yīng)者分析的平均變化：治療后隨訪期間ALSFRS-R斜率改善≥1.5分（底部）

神經(jīng)營養(yǎng)因子

在CSF中評估了體外MSC-NTF細胞分泌的NTF水平。在接受治療的參與者和安慰劑參與者中，血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF) 的平均基礎(chǔ)水平分別為37.1±15.8pg/mL和30.6±14.4pg/mL。移植后，接受治療的參與者的平均VEGF增加為629.8±243.3 ( p=0.016)，安慰劑參與者為-0.78±0.9。基礎(chǔ)肝細胞生長因子 (HGF) 水平很高（治療參與者 391.1±115.9pg/mL；安慰劑參與者448.4±146.3pg/mL）。移植后，接受MSC-NTF治療的參與者的HGF水平顯著增加（平均變化 107.18±34.4；p=0.004），而接受安慰劑的參與者沒有變化（18.8± 22.2；p=0.42）。移植前腦脊液中檢測不到白血病抑制因子 (LIF)，移植后接受治療的參與者顯著增加 (12.33±3.23; p=0.0008)，而安慰劑組在移植前或移植后均未檢測到LIF（圖3A)。

(A) 間充質(zhì)干細胞 (MSC)-神經(jīng)營養(yǎng)因子 (NTF) 細胞的 CSF 中血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)、肝細胞生長因子 (HGF) 和白血病抑制因子 (LIF) 水平顯著增加治療組（上圖），安慰劑組（下圖）沒有可檢測到的變化。

(B) MSC的CSF中單核細胞趨化蛋白1 (MCP-1)、基質(zhì)細胞衍生因子1a (SDF-1) 和殼三糖苷酶 1 (CHIT-1) 水平顯著降低-NTF細胞處理組（上圖）在安慰劑組（下圖）中沒有顯著變化。

討論

該2期臨床試驗達到了其主要終點，證明了通過IM和IT聯(lián)合給藥遞送的MSC-NTF細胞的安全性，并證明了有希望的療效，特別是在預(yù)先指定的快速進展者亞組中。

總之，這些對NTF、炎癥生物標志物和microRNA表達水平的探索性分析首次證明了MSC-NTF在隨機臨床試驗中對ALS患者的生物學(xué)效應(yīng)。這些結(jié)果支持所提出的MSC-NTF旁分泌作用機制以及對神經(jīng)保護和神經(jīng)炎癥的綜合作用。我們觀察到神經(jīng)保護標志物VEGF、HGF、LIF、miR-132p和miR-376的表達增加，神經(jīng)炎癥標志物MCP-1和SDF-1 的表達減少，以及miR-146的增加，進一步支持假設(shè) MSC-NTF 在患有ALS的研究參與者中運作，以增加神經(jīng)保護和減少神經(jīng)炎癥。這兩種相互關(guān)聯(lián)的機制很可能是協(xié)同的。

這項針對MSC-NTF細胞移植的隨機、雙盲、安慰劑對照2期試驗表明，使用骨髓來源的自體MSC-NTF細胞是安全且耐受性良好的。此外，我們已經(jīng)在預(yù)先指定的快速進展者亞群中證明了顯著療效，其中觀察到移植后ALSFRS-R斜率變化的有意義變化。快速進展者中ALSFRS-R評分的穩(wěn)定或逆轉(zhuǎn)為該預(yù)定義ALS亞組中的III期重復(fù)劑量試驗向前邁出了明確的一步。

結(jié)論

間充質(zhì)干細胞聯(lián)合神經(jīng)營養(yǎng)因子細胞的單劑量移植是安全的，并顯示出早期有希望的療效跡象。這為鞘內(nèi)移植間充質(zhì)干細胞移植治療漸凍癥的臨床試驗確立了明確的前進道路。

參考資料：Berry JD, Cudkowicz ME, Windebank AJ, Staff NP, Owegi M, Nicholson K, McKenna-Yasek D, Levy YS, Abramov N, Kaspi H, Mehra M, Aricha R, Gothelf Y, Brown RH. NurOwn, phase 2, randomized, clinical trial in patients with ALS: Safety, clinical, and biomarker results. Neurology. 2019 Dec 10;93(24):e2294-e2305. doi: 10.1212/WNL.0000000000008620. Epub 2019 Nov 18. PMID: 31740545; PMCID: PMC6937497.

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